1）木条的选择
要求使用较硬实，耐蒸煮，不软化，易接种的材料。如树木枝条、竹片、一次性筷子、雪糕棒等。木条的木材最好为阔叶硬木，不能用含芳香物质的松柏木。木条长度一般要比栽培菌袋短2～3厘米。
2）木条的浸泡
常温（20℃左右）条件下，用2%的石灰水浸泡竹片/木条2天，将其泡透。捞出后用清水冲洗干净，阴干待用。
3）辅料的准备
将白面粉和玉米面拌匀后制成辅料，白面粉与玉米面的比例为4︰1。备好的竹片/木条在配制好的辅料中滚动，均匀沾上一层辅料后装瓶（袋）。
4）装瓶（袋）：
制作二级种最好用竹片。将竹片整捆装进菌种瓶或菌种袋中（750毫升的菌种瓶，每瓶可装竹片约160根左右；15×27cm的菌袋，每袋可装240～250根）。装好后顶部铺薄薄一层棉籽壳（事先用2%石灰水洗净），菌种瓶塞上棉塞后盖一层塑料膜，菌袋袋口套上套环，扣盖儿前在环上盖一层塑料膜，然后再盖上盖子准备灭菌，防止水蒸气进入瓶内或袋内；制作三级菌种的方法与二级菌种基本相同，一般选用15×27cm的菌袋，将竹片换作木条或雪糕棒，木条顶部可不用铺放棉籽壳。
5）灭菌
常压灭菌，100℃保持10小时左右，再闷锅10小时以上，保证彻底灭菌。
6）接种
出锅完全冷却后在接种箱内进行无菌接种。先打开盖口，揭掉塑料膜，用灭过菌的胶棒在待接菌种袋内打个孔，接入事先准备好菌种后马上扣盖，然后上架培养。一般试管母种可转接二级种3～4瓶/袋，二级种的接种数量视装竹片数多少（一根竹片可接1瓶/袋三级种）。
7）培养
接种后在22～24℃环境下培养25天左右，再后熟2～3天使菌丝充分吃入木条中后方可使用。这样的菌种接种成活率高，发菌速度快。培养过程注意保持环境的空气流通，否则容易增加污染率。
